RESUMÉ OG FORKLARING TESTEN
Malaria er en myggebåren, hæmolytisk febril sygdom, der inficerer over 200 millioner mennesker og dræber mere end 1 million mennesker om året.Det er forårsaget af fire arter af Plasmodium: P. falciparum, P. vivax, P. ovale og P. malariae.Disse plasmodier inficerer og ødelægger alle menneskelige erytrocytter, hvilket producerer kuldegysninger, feber, anæmi og splenomegali.P. falciparum forårsager mere alvorlig sygdom end de andre plamodiale arter og tegner sig for de fleste malariadødsfald.P. falciparum og P. vivax er de mest almindelige patogener, dog er der betydelig geografisk variation i artsfordelingen.
Traditionelt diagnosticeres malaria ved påvisning af organismerne på Giemsa-farvede tykke udstrygninger af perifert blod, og de forskellige arter af plasmodium er kendetegnet ved deres udseende i inficerede erytrocytter1.Teknikken er i stand til præcis og pålidelig diagnosticering, men kun når den udføres af dygtige mikroskopister ved hjælp af definerede protokoller2, hvilket udgør store forhindringer for fjerntliggende og fattige områder af verden.
Malaria Pf / Pan Antigen Rapid Test Kit er udviklet til at løse disse forhindringer.The test utilizes a pair of monoclonal and polyclonal antibodies to P. falciparum specific protein, Histidine Repeat Protein II (pHRP-II), and a pair of monoclonal antibodies to plasmodium Lactate Dehydrogenase (pLDH), a protein produced by the four species of the plasmodium, thus enables simultaneous detection and differentiation of the infection with P. falciparum and or any of the other three plasmodia.Det kan udføres af utrænet eller minimalt kvalificeret personale uden laboratorieudstyr.
PRINCIP
Pf/Pan Malaria Rapid Test kit er en lateral flow kromatografisk immunanalyse.Teststrimlens komponenter består af: 1) en bordeauxfarvet konjugatpude indeholdende muse anti-pHRP-II antistof konjugeret med kolloid guld (pHRP II-guld konjugater) og mus anti-pLDH antistof konjugeret med kolloid guld (pLDH-guld konjugater),
2) en nitrocellulosemembranstrimmel indeholdende to testbånd (Pan- og Pv-bånd) og et kontrolbånd (C-bånd).Pan-båndet er præcoatet med monoklonalt anti-pLDH-antistof, hvorved infektionen med enhver af de fire arter af plasmodia kan påvises, Pf-båndet er præcoatet med polyklonale anti-pHRP-II-antistoffer til påvisning af Pf-infektion, og C-båndet er coatet med gede-anti-muse IgG.
Under analysen dispenseres et passende volumen af blodprøven i prøvebrønden (S) på testkassetten, en lyseringsbuffer tilsættes til bufferbrønden (B).Bufferen indeholder et detergent, der lyserer de røde blodlegemer og frigiver forskellige plasmodium-antigener, som migrerer ved kapillærvirkning hen over strimlen, der holdes i kassetten.Hvis pHRP-II findes i prøven, vil den binde til pHRP II-guldkonjugaterne.Immunkomplekset fanges derefter på membranen af de præ-coatede anti-pHRPII-antistoffer, der danner et bordeauxfarvet Pf-bånd, hvilket indikerer et Pf-positivt testresultat.pLDH, hvis det er til stede i prøven, vil binde til pLDH-guldkonjugaterne.Immunkomplekset fanges derefter på membranen af det præ-coatede anti-pLDH-antistof, der danner et bordeauxfarvet Pan-bånd, hvilket indikerer et plasmodium-positivt testresultat.I mangel af Pan-bånd kan et positivt testresultat for enhver af de tre andre plasmodier anbefales.
Fravær af testbånd (Pan og Pf) tyder på et negativt resultat.Testen indeholder en intern kontrol (C-bånd), som bør udvise et bordeauxfarvet bånd af immunkomplekset af gede-anti-muse-IgG/muse-IgG (pHRP-II og pLDH-guldkonjugater) uanset farveudviklingen på et af testbåndene.Ellers er testresultatet ugyldigt, og prøven skal testes igen med en anden enhed.
